Rekombinantní

Rekombinantní výroba znamená, že cílový peptid nebo protein exprimuje živá hostitelská buňka upravená tak, aby nesla jeho gen, místo aby byl sestaven chemicky. Typickými hostiteli jsou E. coli, kvasinky Pichia nebo Saccharomyces a savčí linie CHO; produkt se poté extrahuje, v případě potřeby znovu sbalí (refolding) a purifikuje chromatografií.

Proč je rekombinantní výroba důležitá v peptidovém výzkumu

O cestě rozhoduje délka. Chemická syntéza na pevné fázi je efektivní přibližně do 50 zbytků, za touto hranicí činí kumulativní ztráty při kopulaci výtěžky nepraktickými; rekombinantní exprese bez potíží zvládá dlouhé řetězce i celé proteiny a dokáže vytvořit disulfidické vazby a u eukaryotních hostitelů i glykosylaci. Inzulin, růstový hormon a thymosin beta-4 v plné délce jsou rekombinantní produkty, zatímco krátké signální peptidy a fragmenty jsou syntetické.

Profily nečistot se liší, a to určuje, co by měl certifikát analýzy uvádět. Syntetický materiál obsahuje deleční sekvence a zbytková rozpouštědla; rekombinantní materiál obsahuje proteiny hostitelské buňky, hostitelskou DNA a — u bakteriálních hostitelů — endotoxin, který je nutné testovat samostatně, protože čistota podle HPLC jej neodhalí. Rekombinantní materiál je také náchylnější k variabilitě mezi šaržemi. Viz jak číst COA.

Související pojmy

nativní sekvence · analog