Endotoxin

Endotoxin je lipopolysacharid (LPS) z vnější membrány gramnegativních bakterií. Je silným aktivátorem Toll-like receptoru 4, spouští zánětlivou signalizaci již při koncentracích v řádu pikogramů na mililitr a měří se v endotoxinových jednotkách (EU), přičemž přibližně 10 EU odpovídá 1 ng referenčního LPS.

Proč je endotoxin ve výzkumu peptidů důležitý

Jde o samostatnou specifikaci, protože běžné testování čistoty jej nezachytí. Peptid může mít čistotu podle HPLC 99%, a přesto nést tolik endotoxinu, že ovládne imunologický výstup, protože LPS není nečistota související s peptidem a na chromatogramu se neobjeví. V buněčných kulturách, testech s makrofágy a imunitních testech vyvolává kontaminace cytokinové odpovědi, které lze snadno mylně připsat testovanému peptidu — dobře zdokumentovaný zdroj nereprodukovatelných výsledků.

Převládají dvě cesty kontaminace: rekombinantní exprese v bakteriálních hostitelích, kde se LPS kopurifikuje ze samotného hostitele, a voda nebo laboratorní sklo v jinak syntetických postupech. Endotoxin je tepelně stabilní a přežívá autoklávování, takže musí být vyloučen, nikoli zničen. Testuje se testem LAL a v certifikátu analýzy se uvádí pouze na výslovné vyžádání. Viz čtení COA a nezávislé laboratorní testování.

Související pojmy

čistota