Woordenlijst
Recombinant
Recombinant betekent geproduceerd door een gemanipuleerde gastheercel in plaats van langs chemische weg. Waar de grens met synthese ligt en welke onzuiverheden verschillen.
Recombinante productie betekent dat het doelpeptide of -eiwit tot expressie wordt gebracht door een levende gastheercel die is gemanipuleerd om het gen ervan te dragen, in plaats van chemisch te worden opgebouwd. Typische gastheren zijn E. coli, de gisten Pichia of Saccharomyces en CHO-zoogdiercellijnen; het product wordt vervolgens geëxtraheerd, zo nodig opnieuw gevouwen en via chromatografie gezuiverd.
Waarom recombinant ertoe doet in peptideonderzoek
De lengte bepaalt de route. Chemische vastefasesynthese is efficiënt tot ongeveer 50 residuen; daarboven maken cumulatieve koppelingsverliezen de opbrengsten onpraktisch. Recombinante expressie kan lange ketens en volledige eiwitten goed aan en kan disulfidebruggen en, in eukaryote gastheren, glycosylering aanbrengen. Insuline, groeihormoon en thymosine bèta-4 over de volledige lengte zijn recombinante producten, terwijl korte signaalpeptiden en fragmenten synthetisch zijn.
De onzuiverheidsprofielen verschillen, en dat bepaalt wat een analysecertificaat moet rapporteren. Synthetisch materiaal bevat deletiesequenties en residuele oplosmiddelen; recombinant materiaal bevat gastheerceleiwit, gastheer-DNA en — bij bacteriële gastheren — endotoxine, dat afzonderlijk moet worden getest omdat HPLC-zuiverheid het niet aan het licht brengt. Recombinant materiaal is ook gevoeliger voor variatie tussen lots. Zie hoe u een COA leest.
Gerelateerde termen
natieve sequentie · analoog