Ricombinante

La produzione ricombinante prevede che il peptide o la proteina bersaglio siano espressi da una cellula ospite vivente ingegnerizzata per portarne il gene, anziché assemblati chimicamente. Gli ospiti tipici sono E. coli, i lieviti Pichia o Saccharomyces e le linee di mammifero CHO; il prodotto viene poi estratto, eventualmente ripiegato e purificato mediante cromatografia.

Perché la produzione ricombinante è importante nella ricerca sui peptidi

È la lunghezza a decidere la via. La sintesi chimica in fase solida è efficiente fino a circa 50 residui, oltre i quali le perdite cumulative di accoppiamento rendono le rese impraticabili; l'espressione ricombinante gestisce agevolmente catene lunghe e proteine intere e può introdurre ponti disolfuro e, negli ospiti eucariotici, glicosilazione. Insulina, ormone della crescita e timosina beta-4 a lunghezza intera sono prodotti ricombinanti, mentre i brevi peptidi di segnalazione e i frammenti sono sintetici.

I profili di impurezze differiscono, e ciò determina cosa dovrebbe riportare un certificato di analisi. Il materiale sintetico contiene sequenze con delezioni e solventi residui; il materiale ricombinante contiene proteine della cellula ospite, DNA dell'ospite e, per gli ospiti batterici, endotossina, che va testata separatamente perché la purezza HPLC non la rivela. Il materiale ricombinante è inoltre più soggetto a variabilità tra lotti. Si veda come leggere un COA.

Termini correlati

sequenza nativa · analogo