Glossaire
Recombinant
Recombinant : produit par une cellule hôte modifiée plutôt que par voie chimique. Où se situe la frontière avec la synthèse et en quoi les impuretés diffèrent.
La production recombinante signifie que le peptide ou la protéine cible est exprimé par une cellule hôte vivante modifiée pour porter son gène, plutôt qu’assemblé chimiquement. Les hôtes typiques sont E. coli, les levures Pichia ou Saccharomyces et les lignées mammifères CHO ; le produit est ensuite extrait, replié si nécessaire, puis purifié par chromatographie.
Pourquoi la production recombinante compte dans la recherche sur les peptides
La longueur décide de la voie. La synthèse chimique en phase solide est efficace jusqu’à environ 50 résidus, au-delà desquels les pertes de couplage cumulées rendent les rendements irréalistes ; l’expression recombinante prend aisément en charge les chaînes longues et les protéines entières, et peut former des ponts disulfure et, chez les hôtes eucaryotes, des glycosylations. L’insuline, l’hormone de croissance et la thymosine bêta-4 pleine longueur sont des produits recombinants, tandis que les peptides de signalisation courts et les fragments sont synthétiques.
Les profils d’impuretés diffèrent, et c’est ce qui détermine ce qu’un certificat d’analyse doit rapporter. Le produit synthétique contient des séquences de délétion et des solvants résiduels ; le produit recombinant contient des protéines de la cellule hôte, de l’ADN de l’hôte et — pour les hôtes bactériens — des endotoxines, qui doivent être recherchées séparément car la pureté HPLC ne les révèle pas. Le produit recombinant est aussi plus sujet à la variabilité d’un lot à l’autre. Voir comment lire un COA.
Termes associés
séquence native · analogue