Endotoxine

Endotoxine is lipopolysacharide (LPS) uit het buitenmembraan van gramnegatieve bacteriën. Het is een krachtige activator van Toll-like receptor 4, die ontstekingssignalering in gang zet bij concentraties van picogrammen per milliliter, en het wordt gemeten in endotoxine-eenheden (EU), waarbij ongeveer 10 EU overeenkomt met 1 ng referentie-LPS.

Waarom endotoxine ertoe doet in peptideonderzoek

Het is een afzonderlijke specificatie, omdat gewone zuiverheidstests het niet kunnen zien. Een peptide kan volgens HPLC 99% zuiver zijn en toch genoeg endotoxine bevatten om een immunologische uitlezing te domineren, omdat LPS geen peptidegerelateerde onzuiverheid is en niet in het chromatogram verschijnt. In celkweek-, macrofaag- en immuunassays veroorzaakt verontreiniging cytokinereacties die gemakkelijk aan het testpeptide worden toegeschreven — een goed gedocumenteerde bron van niet-reproduceerbare resultaten.

Twee verontreinigingsroutes overheersen: recombinante expressie in bacteriële gastheren, waarbij LPS van de gastheer zelf mee wordt gezuiverd, en water of glaswerk in verder synthetische workflows. Endotoxine is hittestabiel en overleeft autoclaveren, dus het moet worden uitgesloten in plaats van vernietigd. Testen gebeurt met de LAL-assay en wordt alleen op het analysecertificaat vermeld als daar specifiek om wordt gevraagd. Zie een COA lezen en tests door derden.

Gerelateerde termen

zuiverheid