Radioaktivní značka I-125

I-125 (jód-125) je radionuklid emitující záření gama s poločasem přibližně 59.4 dne, který se do peptidů zabudovává elektrofilní substitucí na fenolovém kruhu tyrozinu — nebo, není-li tyrozin přítomen, na histidinu či prostřednictvím konjugovaného Boltonova-Hunterova činidla. Standardními oxidačními metodami jsou chloramin-T a Iodogen.

Proč se stále používá

Důvodem je specifická aktivita. Monojodovaný peptid se může blížit 2,200 Ci/mmol, což umožňuje provádět práce s vazbou na receptory a RIA při skutečných stopových koncentracích, které neruší měřenou rovnováhu. Saturační, kompetiční a kinetické vazebné studie byly postaveny na stopovačích I-125 a velká část literatury o receptorové afinitě peptidových hormonů na nich spočívá.

Praktická omezení

Vše na tomto formátu je řízeno rozpadem. Aktivita se uvádí s referenčním datem a musí být korigována na rozpad; stopovač je obvykle použitelný po jeden až dva poločasy, než jej specifická aktivita a radiolytické poškození učiní nespolehlivým. Použití vyžaduje povolení k nakládání s radioaktivními látkami, gama počítač, stíněnou manipulaci a způsob likvidace odpadu. Radiolýza degraduje i samotný peptid, takže stopovače se skladují zředěné, často se zachytávačem radikálů, a před náročnou prací se znovu purifikují. Peptidy bez tyrozinu mohou vyžadovat modifikaci sekvence, kterou je nutné validovat vůči výchozímu peptidu.

Související pojmy a materiály

biotinová značka · značka FAM/FITC · poločas. Referenční materiál: značené peptidy, testovací kity. Další čtení: průvodce značenými peptidy.