Zuiverheid

Zuiverheid op een peptidecertificaat is vrijwel altijd chromatografische zuiverheid: het oppervlak van de hoofdpiek gedeeld door het totale geïntegreerde oppervlak in een reversed-phase-HPLC-run, uitgedrukt als percentage. Een vermelde ≥98% betekent dat ten minste 98% van het bij 214 nm gedetecteerde UV-signaal onder die methode als één piek elueerde.

Wat het resterende percentage is

De rest is doorgaans syntheseverwant: deletiesequenties waarin één residu ontbreekt, onvolledig ontschermde ketens, geoxideerd methionine, gedeamideerd asparagine of dimeren. Deze liggen structureel dicht bij het doelmolecuul, en daarom elueren ze er dichtbij en is een goed scheidende methode belangrijker dan het koppercentage.

Zuiverheid is geen gehalte

Het onderscheid waarover men struikelt: zuiverheid is relatief ten opzichte van wat de detector ziet. Restwater, het acetaat- of TFA-tegenion en niet-absorberende hulpstoffen hebben geen chromofoor en vallen buiten de berekening. Een peptide dat 99% zuiver is, kan naar gewicht nog steeds voor 15–25% uit zout en water bestaan. Het netto peptidegehalte is een afzonderlijke bepaling, meestal via aminozuuranalyse.

Waarom het ertoe doet

Voor het meeste vergelijkende onderzoek is ≥98% de praktische ondergrens, en het verschil tussen 98% en 99% is minder belangrijk dan de vraag of de identiteit voor hetzelfde lot met massaspectrometrie is bevestigd.

Gerelateerde termen

analysecertificaat. Zie HPLC-zuiverheid uitgelegd.