Čistota

Čistota v certifikátu peptidu je téměř vždy chromatografická čistota: plocha hlavního píku dělená celkovou integrovanou plochou v běhu HPLC s reverzními fázemi, vyjádřená v procentech. Uvedená hodnota ≥98% znamená, že alespoň 98% UV signálu detekovaného při 214 nm eluovalo za dané metody jako jediný pík.

Co tvoří zbývající procenta

Zbytek obvykle souvisí se syntézou: deleční sekvence postrádající jeden zbytek, neúplně odchráněné řetězce, oxidovaný methionin, deamidovaný asparagin nebo dimery. Ty jsou strukturně blízké cílové molekule, a proto eluují v její blízkosti — a proto také dobře rozlišující metoda znamená víc než samotné hlavní číslo.

Čistota není obsah

Rozlišení, které často mate: čistota je relativní vůči tomu, co vidí detektor. Zbytková voda, protiion acetátu nebo TFA a neabsorbující pomocné látky nemají chromofor a do výpočtu se nezahrnují. Peptid o čistotě 99% může přesto hmotnostně obsahovat 15–25% soli a vody. Čistý obsah peptidu (net peptide content) je samostatné stanovení, obvykle aminokyselinovou analýzou.

Proč je to důležité

Pro většinu srovnávacího výzkumu je praktickou spodní hranicí ≥98% a rozdíl mezi 98% a 99% je méně podstatný než to, zda byla identita potvrzena hmotnostní spektrometrií na téže šarži.

Související pojmy

certifikát analýzy. Viz vysvětlení čistoty podle HPLC.