Pureté

La pureté indiquée sur un certificat de peptide est presque toujours une pureté chromatographique : l’aire du pic principal divisée par l’aire totale intégrée lors d’une analyse HPLC en phase inverse, exprimée en pourcentage. Une valeur annoncée de ≥98% signifie qu’au moins 98% du signal UV détecté à 214 nm a été élué sous la forme d’un seul pic avec cette méthode.

Ce que représente le pourcentage restant

Le reste est généralement lié à la synthèse : séquences de délétion auxquelles il manque un résidu, chaînes incomplètement déprotégées, méthionine oxydée, asparagine désamidée ou dimères. Ces impuretés sont structurellement proches de la cible, ce qui explique qu’elles soient éluées à proximité et qu’une méthode bien résolue compte davantage que le chiffre affiché.

La pureté n’est pas la teneur

La distinction qui piège souvent : la pureté est relative à ce que voit le détecteur. L’eau résiduelle, le contre-ion acétate ou TFA et les excipients non absorbants ne possèdent pas de chromophore et sont exclus du calcul. Un peptide pur à 99% peut néanmoins contenir 15–25% de sel et d’eau en masse. La teneur nette en peptide fait l’objet d’une détermination distincte, généralement par analyse des acides aminés.

Pourquoi c’est important

Pour la plupart des travaux comparatifs, le seuil pratique est de ≥98%, et l’écart entre 98% et 99% compte moins que le fait de savoir si l’identité a été confirmée par spectrométrie de masse sur le même lot.

Termes associés

certificat d’analyse. Voir la pureté HPLC expliquée.