Massaspectrometrie

Massaspectrometrie bevestigt de identiteit van een peptide door de waargenomen massa te toetsen aan de theoretische massa. Zo leest u de MS-regel op een COA.

Massaspectrometrie (MS) ioniseert een monster en meet massa-ladingsverhoudingen, waaruit de molecuulmassa wordt berekend. Op een peptidecertificaat beantwoordt ze de identiteitsvraag die chromatografie niet kan beantwoorden: is het molecuul in deze flacon de sequentie op het etiket? Elektrospray-ionisatie (ESI-MS) en MALDI-TOF zijn de twee methoden die gewoonlijk worden genoemd.

De MS-regel lezen

Vergelijk de waargenomen massa met de theoretische massa die uit de sequentie is berekend. Ze horen overeen te komen binnen de vermelde tolerantie van het instrument — doorgaans een fractie van een dalton op een modern ESI-instrument, enkele daltons op MALDI-TOF. ESI-spectra van peptiden tonen een reeks meervoudig geladen ionen ([M+2H]2+, [M+3H]3+) die software deconvolueert tot één neutrale massa; een certificaat dat alleen een ruwe m/z vermeldt zonder de ladingstoestand te noemen, is onvolledig.

Diagnostische massaverschillen

Veelvoorkomende verschuivingen zijn informatief: +16 Da wijst op oxidatie, doorgaans bij methionine; −0,98 Da onderscheidt een C-terminaal amide van het vrije zuur; +42 Da duidt op acetylering; +1 Da kan deamidering betekenen. Een afwijking van precies de massa van één residu wijst op een deletie of substitutie.

Waarom het ertoe doet

Een hoog HPLC-cijfer voor het verkeerde molecuul is waardeloos. Identiteit plus zuiverheid voor hetzelfde lot is het minimale geloofwaardige paar op een analysecertificaat.

Zie massaspectrometrie en peptide-identiteit.