Czystość

Czystość w certyfikacie peptydu to niemal zawsze czystość chromatograficzna: powierzchnia piku głównego podzielona przez łączną scałkowaną powierzchnię w analizie HPLC w odwróconym układzie faz, wyrażona w procentach. Deklarowane ≥98% oznacza, że co najmniej 98% sygnału UV wykrytego przy 214 nm wyeluowało się w tej metodzie jako jeden pik.

Czym jest pozostały procent

Reszta jest zwykle związana z syntezą: sekwencje delecyjne pozbawione jednej reszty, łańcuchy niecałkowicie odblokowane, utleniona metionina, deamidowana asparagina lub dimery. Są one strukturalnie zbliżone do cząsteczki docelowej, dlatego eluują się w jej pobliżu i dlatego dobra rozdzielczość metody ma większe znaczenie niż sama liczba w nagłówku.

Czystość to nie zawartość

Rozróżnienie, które najczęściej prowadzi do pomyłek: czystość jest względna wobec tego, co widzi detektor. Resztkowa woda, przeciwjon octanowy lub TFA oraz nieabsorbujące substancje pomocnicze nie mają chromoforu i są wyłączone z obliczeń. Peptyd o czystości 99% może nadal w 15–25% masy składać się z soli i wody. Zawartość czystego peptydu (net peptide content) to odrębne oznaczenie, zwykle wykonywane analizą aminokwasów.

Dlaczego to ważne

W większości badań porównawczych praktycznym minimum jest ≥98%, a różnica między 98% a 99% ma mniejsze znaczenie niż to, czy tożsamość potwierdzono spektrometrią mas dla tej samej partii.

Powiązane terminy

certyfikat analizy. Zob. objaśnienie czystości HPLC.