Purezza

La purezza riportata sul certificato di un peptide è quasi sempre la purezza cromatografica: l'area del picco principale divisa per l'area integrata totale in una corsa HPLC a fase inversa, espressa in percentuale. Un valore dichiarato ≥98% significa che almeno il 98% del segnale UV rilevato a 214 nm è eluito come un singolo picco con quel metodo.

Che cosa rappresenta la percentuale restante

Il resto è tipicamente legato alla sintesi: sequenze prive di un residuo (delezioni), catene non completamente deprotette, metionina ossidata, asparagina deamidata o dimeri. Si tratta di strutture molto simili al bersaglio, ed è per questo che eluiscono vicino a esso e che un metodo ben risolto conta più del valore dichiarato.

Purezza non è contenuto

La distinzione che trae in inganno: la purezza è relativa a ciò che il rivelatore vede. Acqua residua, controione acetato o TFA ed eccipienti non assorbenti non hanno cromofori e sono esclusi dal calcolo. Un peptide puro al 99% può comunque essere costituito per il 15–25% del peso da sale e acqua. Il contenuto peptidico netto è una determinazione separata, di solito mediante analisi degli amminoacidi.

Perché è importante

Per la maggior parte della ricerca comparativa la soglia pratica è ≥98%, e la differenza tra 98% e 99% conta meno del fatto che l'identità sia stata confermata mediante spettrometria di massa sullo stesso lotto.

Termini correlati

certificato di analisi. Si veda la purezza HPLC spiegata.