Péptidos e anticorpos para investigação oncológica: guia do catálogo de investigação

Os péptidos para investigação oncológica e os anticorpos deste catálogo desempenham quatro funções experimentais distintas: atuam como ligandos de pontos de controlo e de recetores em ensaios de imuno-oncologia, como moduladores da angiogénese, como padrões de marcadores tumorais para imunoensaios quantitativos e como substratos de proteases no estudo da invasão. A nossa página temática de oncologia reúne os padrões peptídicos, antissoros, traçadores marcados e kits que os laboratórios encomendam para esse trabalho, agrupados por molécula de origem. Este guia explica que famílias integram o tema, para que é encomendada cada uma e que formato de reagente se adequa a cada questão.

O que se inclui no tema da oncologia

A inclusão faz-se aqui pela utilização em investigação, e não por qualquer alegação sobre a molécula. Uma família surge em oncologia quando a sua proteína ou péptido de origem é um alvo, marcador ou ferramenta estabelecido na literatura oncológica — proteínas de ponto de controlo, reguladores da angiogénese, hormonas intestinais com recetores mitogénicos documentados em linhas tumorais, proteases implicadas na degradação da matriz e marcadores secretados utilizados para estadiar ou acompanhar a doença em modelos. Muitas famílias são partilhadas com outros temas: a somatostatina surge no trabalho sobre neuropéptidos, a adiponectina em estudos sobre obesidade. Nada nesta secção é terapêutico; todos os artigos são fornecidos exclusivamente para investigação in vitro e em animais devidamente aprovada.

Reagentes de pontos de controlo imunitário e de imuno-oncologia

A biologia dos pontos de controlo representa uma grande parte das encomendas atuais. As famílias relevantes fornecem péptidos de bloqueio, fragmentos do domínio extracelular e os antissoros utilizados para detetar a expressão em tecido tumoral:

• PD-1 e PD-L1 — fragmentos peptídicos que abrangem a interface de interação, utilizados em ensaios de competição, em estudos de ligação e como imunogénios; antissoros para a pontuação imuno-histoquímica de cortes tumorais.
• CTLA-4 — o segundo eixo clássico de pontos de controlo, encomendado como padrões peptídicos e anticorpos para trabalho de coestimulação de células T.
• Famílias do TNF e das interleucinas — péptidos e fragmentos de citocinas para estudos do microambiente tumoral e como calibradores de painéis multiplex.
• Quimiocinas CXCL e CCL, bem como o SDF-1 (CXCL12) — ensaios de quimiotaxia e de direcionamento metastático; o eixo SDF-1/CXCR4 é um dos mais estudados na disseminação tumoral.

Angiogénese e péptidos antiangiogénicos

A literatura sobre angiogénese é invulgarmente rica em péptidos, porque vários inibidores endógenos são fragmentos proteolíticos de proteínas da matriz de maiores dimensões:

• Endostatina — o fragmento C-terminal do colagénio XVIII, o inibidor endógeno arquetípico da angiogénese em ensaios de migração endotelial e de formação de tubos.
• Anginex — um péptido em folha beta concebido que tem como alvo a galectina-1 no endotélio ativado; uma ferramenta sintética e não um fragmento natural.
• Vasoibina e PEDF — reguladores negativos derivados do endotélio, encomendados como padrões e para deteção por anticorpos.
• Trombospondina — os péptidos das repetições de tipo 1 da TSP-1 (incluindo a linhagem ABT-510) são controlos positivos padrão em rastreios antiangiogénicos.
• Angiopoietina — reagentes da via Ang-1/Ang-2 e Tie2 para estudos de estabilidade vascular, com forte sobreposição com o tema cardiovascular.

Marcadores tumorais e famílias de fatores de crescimento e de invasão

As restantes famílias dividem-se entre marcadores medidos em amostras e ferramentas mecanísticas:

• Cromogranina A — o marcador secretor padrão dos tumores neuroendócrinos e um dos alvos de kits de ensaio mais frequentemente encomendados neste tema.
• Gastrina e CCK — sinalização do recetor CCK-B/gastrina em linhas tumorais gastrointestinais; encomendadas como péptidos de comprimento completo e como análogos seletivos para recetores.
• Bombesina e péptido libertador de gastrina — circuitos autócrinos de crescimento historicamente importantes em modelos de carcinoma pulmonar de pequenas células, ainda utilizados no desenvolvimento de sondas dirigidas ao GRPR.
• Somatostatina — a farmacologia dos subtipos SSTR está na base tanto da imagiologia de tumores neuroendócrinos como de um vasto conjunto de trabalho celular antiproliferativo.
• Survivina e péptidos da família Bcl — ferramentas de regulação da apoptose, incluindo péptidos do domínio BH3 utilizados para sondar o priming mitocondrial.
• uPAR, catepsina e autotaxina — o grupo da invasão e da remodelação da matriz; os substratos das catepsinas são habitualmente encomendados como péptidos marcados fluorogénicos.
• Osteopontina e glipicano — famílias de adesão e de correcetores com papéis estabelecidos como marcadores, sobretudo o glipicano-3 em modelos hepatocelulares.
• TGF-β — supressor e promotor tumoral dependente do contexto; os padrões peptídicos e os antissoros apoiam ambos os sentidos dessa literatura.

Que formatos contém o tema da oncologia

Quatro tipos de produto repetem-se nestas famílias. Os padrões peptídicos sintéticos são os cavalos de batalha: péptidos de bloqueio, ligandos de recetores e imunogénios, tipicamente com pureza por HPLC ≥95% em enchimentos de micrograma a miligrama. Os péptidos marcados importam mais aqui do que na maioria dos temas, porque os ensaios de proteases dependem de substratos fluorogénicos com par FRET e porque os ligandos biotinilados sustentam o trabalho de pull-down. Os antissoros policlonais apoiam a imuno-histoquímica em cortes tumorais e a deteção por Western. Os kits ELISA e EIA quantificam marcadores secretados, como a cromogranina A ou a endostatina, no plasma e em meio condicionado. Os pull-downs e as imunoprecipitações utilizam adicionalmente esferas magnéticas, e os projetos de mapeamento de epítopos utilizam bibliotecas de péptidos — os varrimentos sobrepostos de um antigénio tumoral são um pedido de rotina.

Como os laboratórios escolhem dentro de uma família

Dominam três decisões. Primeira, fragmento versus comprimento completo: o trabalho com pontos de controlo utiliza quase sempre fragmentos da interface, e não todo o ectodomínio, e um péptido de bloqueio é validado para absorver um anticorpo e não para farmacologia de recetores. Segunda, a espécie: os modelos de xenoenxerto e singénicos em ratinho necessitam de reagentes com a sequência de ratinho, e a reatividade cruzada de um antissoro produzido contra a sequência humana não pode ser presumida — cada artigo indica a sua reatividade por espécie. Terceira, a compatibilidade com o ensaio: um substrato fluorogénico é definido tanto pelo seu par de marcadores e pela química de extinção como pela sua sequência, pelo que se deve verificar o perfil de excitação e emissão face ao leitor de placas antes de encomendar.

Notas de manuseamento para este tema

A maioria dos péptidos do tema oncológico é pequena, liofilizada e estável durante anos, selada a −20 °C. Aplicam-se duas cautelas mais do que o habitual. As sequências hidrofóbicas — vários péptidos derivados de BH3 e da trombospondina — dissolvem-se mal em tampão aquoso e podem necessitar de um cossolvente orgânico; ver solubilidade de péptidos. E os substratos fluorogénicos são sensíveis à luz: aliquotar com luz reduzida e armazenar em frascos âmbar. A prática geral encontra-se no guia de armazenamento, no guia de aliquotagem e, para verificação do teor, no guia do COA.

Para onde ir a seguir

Consulte o tema oncológico completo ou comece pelo portal do catálogo de investigação. Os guias afins abrangem a secção cardiovascular, que partilha as famílias da angiogénese, e o guia do tipo kits de ensaio, se a sua questão for a quantificação de marcadores e não o mecanismo.