Endotossina

L'endotossina è il lipopolisaccaride (LPS) della membrana esterna dei batteri Gram-negativi. È un potente attivatore del recettore Toll-like 4, che innesca la segnalazione infiammatoria a concentrazioni di picogrammi per millilitro, e si misura in unità di endotossina (EU), dove circa 10 EU corrispondono a 1 ng di LPS di riferimento.

Perché l'endotossina è importante nella ricerca sui peptidi

È una specifica separata perché i normali test di purezza non possono rilevarla. Un peptide può essere puro al 99% in HPLC e contenere comunque abbastanza endotossina da dominare un parametro immunologico, poiché l'LPS non è un'impurezza correlata al peptide e non compare nel cromatogramma. Nei saggi su colture cellulari, macrofagi e sistema immunitario, la contaminazione produce risposte citochiniche facilmente attribuite per errore al peptide in esame: una fonte ben documentata di risultati non riproducibili.

Prevalgono due vie di contaminazione: l'espressione ricombinante in ospiti batterici, in cui l'LPS co-purifica dall'ospite stesso, e l'acqua o la vetreria in flussi di lavoro altrimenti sintetici. L'endotossina è termostabile e resiste all'autoclave, per cui deve essere esclusa anziché distrutta. Si analizza mediante saggio LAL, riportato sul certificato di analisi solo su specifica richiesta. Si vedano come leggere un COA e i test di terze parti.

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