Péptido de bloqueio

Um péptido de bloqueio (também designado péptido competidor ou péptido neutralizante) é o péptido sintético livre correspondente à sequência do imunogénio utilizada para produzir um determinado anticorpo. É fornecido juntamente com o anticorpo com um único objetivo: demonstrar que o sinal observado provém do epítopo pretendido.

Como funciona o controlo

O anticorpo é pré-incubado com um excesso molar do péptido — normalmente de várias a cem vezes, otimizado empiricamente — antes de ser aplicado ao blot, à placa ou ao corte. Se o sinal for específico do epítopo, deverá ser abolido ou fortemente reduzido; as bandas que persistem são inespecíficas ou refletem um epítopo distinto com reatividade cruzada. As condições bloqueada e não bloqueada devem ser analisadas lado a lado na mesma amostra, e vale a pena incluir a condição apenas com péptido para confirmar que o próprio péptido não contribui com sinal.

As limitações devem ser indicadas com clareza: o controlo prova a dependência do epítopo, não que a proteína marcada seja a proteína que se presume. Uma proteína não relacionada que partilhe esse epítopo linear curto comportar-se-ia de forma idêntica. O knockout ou knockdown genético continua a ser o controlo de especificidade mais robusto; o bloqueio com péptido é o controlo prático.

Termos e material relacionados

policlonal vs monoclonal · IgG purificada · ELISA · sequência nativa. Material de referência: anticorpos, bibliotecas de péptidos. Leitura complementar: anticorpos na investigação de péptidos.