Blokkerend peptide

Een blokkerend peptide (ook peptidecompetitor of neutraliserend peptide) is het vrije synthetische peptide dat overeenkomt met de immunogeensequentie waarmee een bepaald antilichaam is opgewekt. Het wordt samen met het antilichaam geleverd met één doel: aantonen dat een waargenomen signaal van het beoogde epitoop afkomstig is.

Hoe de controle werkt

Het antilichaam wordt vooraf geïncubeerd met een molaire overmaat van het peptide — gewoonlijk een meervoudige tot honderdvoudige overmaat, empirisch geoptimaliseerd — voordat het op de blot, plaat of coupe wordt aangebracht. Als het signaal epitoopspecifiek is, hoort het te verdwijnen of sterk af te nemen; banden die blijven, zijn niet-specifiek of weerspiegelen een ander, kruisreactief epitoop. De geblokkeerde en de niet-geblokkeerde conditie moeten naast elkaar op hetzelfde monster worden uitgevoerd, en het loont om een conditie met alleen peptide op te nemen om te bevestigen dat het peptide zelf geen signaal bijdraagt.

De beperkingen horen ronduit te worden benoemd: de controle bewijst epitoopafhankelijkheid, niet dat het gekleurde eiwit het eiwit is dat u veronderstelt. Een niet-verwant eiwit dat dat korte lineaire epitoop deelt, zou zich identiek gedragen. Genetische knock-out of knock-down blijft de sterkere specificiteitscontrole; blokkering met peptide is de praktische.

Gerelateerde termen en materiaal

polyklonaal versus monoklonaal · gezuiverd IgG · ELISA · natieve sequentie. Referentiemateriaal: antilichamen, peptidebibliotheken. Verder lezen: antilichamen in peptideonderzoek.