Peptidă de blocare

O peptidă de blocare (numită și peptidă competitoare sau peptidă de neutralizare) este peptida sintetică liberă care corespunde secvenței imunogenului folosit pentru obținerea unui anumit anticorp. Este furnizată împreună cu anticorpul cu un singur scop: de a demonstra că semnalul observat provine de la epitopul vizat.

Cum funcționează controlul

Anticorpul este preincubat cu un exces molar de peptidă — de regulă un exces de câteva ori până la de o sută de ori, optimizat empiric — înainte de a fi aplicat pe blot, placă sau secțiune. Dacă semnalul este specific epitopului, ar trebui să fie abolit sau puternic redus; benzile care persistă sunt nespecifice sau reflectă un epitop distinct cu reactivitate încrucișată. Ambele condiții, cu și fără blocare, trebuie rulate în paralel pe aceeași probă, iar condiția doar cu peptidă merită inclusă pentru a confirma că peptida însăși nu contribuie la semnal.

Limitările trebuie precizate clar: controlul dovedește dependența de epitop, nu faptul că proteina colorată este proteina pe care o presupuneți. O proteină fără legătură care are același epitop liniar scurt s-ar comporta identic. Knockout-ul sau knockdown-ul genetic rămâne controlul de specificitate mai puternic; blocarea cu peptidă este cel practic.

Termeni și materiale înrudite

policlonal vs monoclonal · IgG purificat · ELISA · secvență nativă. Material de referință: anticorpi, biblioteci de peptide. Lectură suplimentară: anticorpii în cercetarea peptidelor.