Blocking-Peptid

Ein Blocking-Peptid (auch Kompetitor- oder neutralisierendes Peptid) ist das freie synthetische Peptid, das der Immunogensequenz entspricht, mit der ein bestimmter Antikörper erzeugt wurde. Es wird zusammen mit dem Antikörper zu einem einzigen Zweck geliefert: um nachzuweisen, dass ein beobachtetes Signal vom vorgesehenen Epitop stammt.

Wie die Kontrolle funktioniert

Der Antikörper wird mit einem molaren Überschuss des Peptids vorinkubiert — üblicherweise einem mehrfachen bis hundertfachen Überschuss, empirisch optimiert —, bevor er auf Blot, Platte oder Schnitt aufgebracht wird. Ist das Signal epitopspezifisch, sollte es verschwinden oder stark abnehmen; Banden, die bestehen bleiben, sind unspezifisch oder spiegeln ein anderes kreuzreaktives Epitop wider. Die geblockte und die ungeblockte Bedingung müssen nebeneinander an derselben Probe laufen, und es lohnt sich, eine Bedingung nur mit Peptid einzuschließen, um zu bestätigen, dass das Peptid selbst kein Signal beiträgt.

Die Grenzen sollten klar benannt werden: Die Kontrolle belegt die Epitopabhängigkeit, nicht aber, dass das gefärbte Protein das Protein ist, das Sie annehmen. Ein nicht verwandtes Protein mit demselben kurzen linearen Epitop würde sich identisch verhalten. Genetischer Knockout oder Knockdown bleibt die stärkere Spezifitätskontrolle; das Peptid-Blocking ist die praktikable.

Verwandte Begriffe und Materialien

polyklonal vs. monoklonal · gereinigtes IgG · ELISA · native Sequenz. Referenzmaterial: Antikörper, Peptidbibliotheken. Weiterführende Lektüre: Antikörper in der Peptidforschung.