Peptide bloccante

Un peptide bloccante (detto anche peptide competitore o peptide neutralizzante) è il peptide sintetico libero corrispondente alla sequenza dell'immunogeno utilizzato per produrre un determinato anticorpo. Viene fornito insieme all'anticorpo per un unico scopo: dimostrare che il segnale osservato deriva dall'epitopo previsto.

Come funziona il controllo

L'anticorpo viene preincubato con un eccesso molare del peptide — comunemente da alcune volte fino a cento volte, ottimizzato empiricamente — prima di essere applicato al blot, alla piastra o alla sezione. Se il segnale è epitopo-specifico dovrebbe essere abolito o fortemente ridotto; le bande che persistono sono aspecifiche o riflettono un epitopo distinto a reattività crociata. Le condizioni con e senza blocco devono essere eseguite in parallelo sullo stesso campione, ed è utile includere la condizione con il solo peptide per confermare che il peptide stesso non contribuisca al segnale.

I limiti vanno dichiarati con chiarezza: il controllo dimostra la dipendenza dall'epitopo, non che la proteina colorata sia quella presunta. Una proteina non correlata che condivida quel breve epitopo lineare si comporterebbe in modo identico. Il knockout o il knockdown genetico restano il controllo di specificità più robusto; il blocco con peptide è quello pratico.

Termini e materiali correlati

policlonale vs monoclonale · IgG purificate · ELISA · sequenza nativa. Materiale di riferimento: anticorpi, librerie peptidiche. Approfondimenti: gli anticorpi nella ricerca sui peptidi.