Degradação

Degradação é o termo coletivo para qualquer processo pelo qual um péptido deixa de ser a molécula pretendida. Convém distinguir as vias químicas, que alteram a estrutura covalente, das físicas, que alteram o estado sem modificar a química.

As principais vias de degradação

A hidrólise cliva a própria ligação peptídica, acelerada pela água, pelo calor e por valores extremos de pH, e as sequências Asp-Pro são particularmente lábeis. A desamidação converte a asparagina ou a glutamina nas respetivas formas ácidas através de um intermediário succinimida, acrescentando 1 Da e criando frequentemente um isoaspartato que altera a conformação; os motivos Asn-Gly são o ponto crítico clássico. A oxidação acrescenta 16 Da por átomo de oxigénio na metionina, cisteína ou triptofano. A troca de pontes dissulfureto baralha os emparelhamentos de cisteínas em sequências ciclizadas. Do ponto de vista físico, a agregação conduz as cadeias solúveis a oligómeros e partículas visíveis, e a adsorção simplesmente retira péptido para as paredes do recipiente.

Porque é importante

Cada via tem uma assinatura. A HPLC mostra novos picos ou um pico principal deslocado, enquanto a espectrometria de massa mostra o desvio de massa revelador — mais 16 para a oxidação, mais 1 para a desamidação, uma massa inferior para a clivagem. Um lote degradado pode continuar a ter um aspeto impecável, razão pela qual as condições de armazenamento e um certificado de análise atual têm mais peso do que o aspeto. Consulte o guia de armazenamento.

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