Ciclo de congelação-descongelação

Um ciclo de congelação-descongelação é uma passagem completa de uma solução do estado congelado ao estado líquido e de volta. Os estudos de estabilidade indicam a tolerância em número destas repetições porque o dano é cumulativo e depende de quantas transições ocorrem, e não do tempo total passado em congelação.

Porque o dano por congelação-descongelação é importante na investigação de péptidos

Durante a mudança de fase atuam três mecanismos. À medida que o gelo se forma, as espécies dissolvidas são excluídas da rede cristalina e concentram-se fortemente na fração líquida remanescente, pelo que as concentrações locais de péptido e de sal sobem muito acima dos valores nominais. Os componentes do tampão podem cristalizar em momentos diferentes — sabe-se que os tampões de fosfato de sódio alteram o pH em mais de uma unidade durante a congelação —, expondo o péptido a condições que nunca encontra à temperatura ambiente. E cada interface gelo-água oferece uma superfície onde cadeias parcialmente desdobradas se associam de forma irreversível.

O resultado visível é turvação, partículas ou uma quebra da potência medida; o invisível é uma perda lenta da espécie intacta que só uma nova verificação por HPLC revelaria. A defesa padrão consiste em dividir a solução-mãe reconstituída em alíquotas de utilização única antes da primeira congelação, utilizando frascos vazios estéreis. Os pormenores práticos encontram-se no guia de armazenamento e no guia de preparação de alíquotas.

Termos relacionados

estabilidade · degradação · cadeia de frio