ELISA

O ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) é um imunoensaio em placa no qual a captura do analito é reportada por uma enzima — normalmente HRP ou fosfatase alcalina — conjugada a um anticorpo, que converte um substrato como o TMB num produto corado lido num espetrofotómetro.

Formatos e qual deles um péptido exige

Há quatro formatos padrão. Os ELISA direto e indireto revestem a placa com o antigénio e detetam-no com um anticorpo marcado ou com um anticorpo secundário marcado. O ELISA em sanduíche utiliza um anticorpo de captura e um anticorpo de deteção dirigidos contra dois epítopos distintos e é o mais sensível e específico — mas requer um analito suficientemente grande para apresentar dois epítopos em simultâneo, pelo que não está disponível para a maioria dos péptidos curtos. O ELISA competitivo resolve esse problema: o antigénio marcado compete com o analito da amostra por uma quantidade limitada de anticorpo, e o sinal diminui à medida que o analito aumenta. Os péptidos curtos são, por isso, normalmente quantificados por ensaio competitivo com uma curva padrão inversa.

Ler um kit de forma crítica significa verificar a reatividade cruzada declarada, a reatividade de espécie e se o calibrador tem a mesma forma de sal e a mesma sequência que a amostra. O modelo de curva habitual é um ajuste logístico de quatro parâmetros, e não uma reta.

Termos e material relacionados

RIA · imunogénio · péptido de bloqueio. Material de referência: kits de ensaio. Leitura complementar: kits ELISA para investigação de péptidos e como os kits ELISA e RIA quantificam péptidos.