ELISA

El ELISA (ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas) es un inmunoensayo en placa en el que la captura del analito se detecta mediante una enzima —normalmente HRP o fosfatasa alcalina— conjugada a un anticuerpo, que convierte un sustrato como el TMB en un producto coloreado que se lee en un espectrofotómetro.

Formatos y cuál necesita un péptido

Hay cuatro formatos estándar. Los ELISA directo e indirecto recubren la placa con el antígeno y lo detectan con un anticuerpo marcado o con un secundario marcado. El ELISA tipo sándwich emplea un anticuerpo de captura y uno de detección dirigidos contra dos epítopos distintos y es el más sensible y específico, pero requiere un analito lo bastante grande para presentar dos epítopos a la vez, por lo que no es viable para la mayoría de los péptidos cortos. El ELISA competitivo resuelve ese problema: el antígeno marcado compite con el analito de la muestra por una cantidad limitada de anticuerpo, y la señal disminuye a medida que aumenta el analito. Por eso los péptidos cortos se cuantifican normalmente mediante un ensayo competitivo con una curva estándar inversa.

Evaluar un kit con sentido crítico significa comprobar la reactividad cruzada declarada, la reactividad de especie y si el calibrador tiene la misma forma salina y secuencia que su muestra. El modelo de curva habitual es un ajuste logístico de cuatro parámetros, no una recta.

Términos y material relacionados

RIA · inmunógeno · péptido de bloqueo. Material de referencia: kits de ensayo. Lectura adicional: kits ELISA para la investigación con péptidos y cómo cuantifican péptidos los kits ELISA y RIA.