ELISA

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) is een immunoassay op een plaat waarbij de binding van de analyt wordt gerapporteerd door een enzym — meestal HRP of alkalische fosfatase — dat aan een antilichaam is geconjugeerd en een substraat zoals TMB omzet in een gekleurd product dat met een spectrofotometer wordt afgelezen.

Formaten, en welk formaat een peptide nodig heeft

Er zijn vier standaardformaten. Directe en indirecte ELISA's coaten het antigeen en detecteren het met een gelabeld antilichaam of een gelabeld secundair antilichaam. Een sandwich-ELISA gebruikt een vang- en een detectieantilichaam tegen twee verschillende epitopen en is het gevoeligst en het specifiekst — maar vereist een analyt die groot genoeg is om twee epitopen tegelijk te presenteren, en is daarom voor de meeste korte peptiden niet beschikbaar. Een competitieve ELISA lost dat op: gelabeld antigeen concurreert met de analyt uit het monster om een beperkte hoeveelheid antilichaam, en het signaal daalt naarmate de analyt stijgt. Korte peptiden worden daarom normaal gesproken gekwantificeerd met een competitieve assay met een omgekeerde standaardcurve.

Een kit kritisch lezen betekent de vermelde kruisreactiviteit en soortreactiviteit controleren, en nagaan of de kalibrator dezelfde zoutvorm en sequentie heeft als uw monster. Een logistische fit met vier parameters, geen rechte lijn, is het gebruikelijke curvemodel.

Gerelateerde termen en materiaal

RIA · immunogeen · blokkerend peptide. Referentiemateriaal: assaykits. Verder lezen: ELISA-kits voor peptideonderzoek en hoe ELISA- en RIA-kits peptiden kwantificeren.