ELISA

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) ist ein plattenbasierter Immunassay, bei dem die Bindung des Analyten durch ein Enzym angezeigt wird — meist HRP oder alkalische Phosphatase —, das an einen Antikörper konjugiert ist und ein Substrat wie TMB in ein farbiges Produkt umsetzt, das photometrisch gemessen wird.

Formate und welches ein Peptid benötigt

Vier Formate sind Standard. Direkte und indirekte ELISAs beschichten das Antigen und weisen es mit einem markierten bzw. einem über einen Sekundärantikörper markierten Antikörper nach. Der Sandwich-ELISA verwendet einen Capture- und einen Detektionsantikörper gegen zwei verschiedene Epitope und ist am empfindlichsten und spezifischsten — setzt aber einen Analyten voraus, der groß genug ist, um zwei Epitope gleichzeitig zu präsentieren, und ist daher für die meisten kurzen Peptide nicht verfügbar. Der kompetitive ELISA löst dieses Problem: Markiertes Antigen konkurriert mit dem Analyten der Probe um eine begrenzte Menge Antikörper, und das Signal sinkt, wenn der Analytgehalt steigt. Kurze Peptide werden daher normalerweise per kompetitivem Assay mit einer inversen Standardkurve quantifiziert.

Ein Kit kritisch zu lesen bedeutet, die angegebene Kreuzreaktivität und Speziesreaktivität zu prüfen und festzustellen, ob der Kalibrator dieselbe Salzform und Sequenz wie Ihre Probe hat. Das übliche Kurvenmodell ist eine logistische Vier-Parameter-Anpassung, keine Gerade.

Verwandte Begriffe und Materialien

RIA · Immunogen · Blocking-Peptid. Referenzmaterial: Assay-Kits. Weiterführende Lektüre: ELISA-Kits für die Peptidforschung sowie wie ELISA- und RIA-Kits Peptide quantifizieren.