ELISA

L’ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, dosage immuno-enzymatique) est un immunodosage sur plaque dans lequel la capture de l’analyte est signalée par une enzyme — généralement la HRP ou la phosphatase alcaline — conjuguée à un anticorps et convertissant un substrat tel que le TMB en un produit coloré lu au spectrophotomètre.

Les formats, et celui qu’exige un peptide

Quatre formats sont standard. Les ELISA direct et indirect fixent l’antigène sur la plaque et le détectent avec un anticorps marqué ou un anticorps secondaire marqué. L’ELISA sandwich utilise un anticorps de capture et un anticorps de détection dirigés contre deux épitopes distincts ; c’est le plus sensible et le plus spécifique — mais il exige un analyte assez grand pour présenter deux épitopes simultanément, ce qui l’exclut pour la plupart des peptides courts. L’ELISA compétitif résout ce problème : l’antigène marqué entre en compétition avec l’analyte de l’échantillon pour une quantité limitée d’anticorps, et le signal diminue quand l’analyte augmente. Les peptides courts sont donc normalement quantifiés par essai compétitif, avec une courbe étalon inverse.

Lire un kit avec esprit critique, c’est vérifier la réactivité croisée annoncée, la réactivité d’espèce, et si le calibrant a la même forme de sel et la même séquence que votre échantillon. Le modèle de courbe habituel est un ajustement logistique à quatre paramètres, et non une droite.

Termes et matériels associés

RIA · immunogène · peptide bloquant. Matériel de référence : kits de dosage. Pour aller plus loin : les kits ELISA pour la recherche sur les peptides et comment les kits ELISA et RIA quantifient les peptides.