Glosář
ELISA
Vysvětlení formátů ELISA (přímá, nepřímá, sendvičová, kompetitivní), proč krátké peptidy vyžadují kompetitivní testy a jak číst kalibrační křivku.
ELISA (enzymově vázaný imunosorbentní test) je imunotest na destičkách, v němž záchyt analytu signalizuje enzym — obvykle HRP nebo alkalická fosfatáza — konjugovaný s protilátkou, který přeměňuje substrát, jako je TMB, na barevný produkt odečítaný spektrofotometrem.
Formáty a který z nich peptid potřebuje
Standardní jsou čtyři formáty. Přímá a nepřímá ELISA potahují jamky antigenem a detekují jej značenou protilátkou nebo protilátkou se značenou sekundární protilátkou. Sendvičová ELISA využívá záchytnou a detekční protilátku proti dvěma odlišným epitopům a je nejcitlivější a nejspecifičtější — vyžaduje však analyt dostatečně velký, aby současně nabízel dva epitopy, takže pro většinu krátkých peptidů není k dispozici. Tento problém řeší kompetitivní ELISA: značený antigen soutěží s analytem ze vzorku o omezené množství protilátky a signál s rostoucím množstvím analytu klesá. Krátké peptidy se proto obvykle kvantifikují kompetitivním testem s inverzní kalibrační křivkou.
Kritické posouzení kitu znamená ověřit uvedenou zkříženou reaktivitu, druhovou reaktivitu a to, zda má kalibrátor stejnou solnou formu a sekvenci jako Váš vzorek. Obvyklým modelem křivky je čtyřparametrická logistická regrese, nikoli přímka.
Související pojmy a materiály
RIA · imunogen · blokující peptid. Referenční materiál: testovací kity. Další čtení: kity ELISA pro výzkum peptidů a jak kity ELISA a RIA kvantifikují peptidy.