Słownik
ELISA
Formaty ELISA (bezpośredni, pośredni, kanapkowy, kompetycyjny) oraz dlaczego krótkie peptydy wymagają testów kompetycyjnych i jak czytać krzywą wzorcową.
ELISA (test immunoenzymatyczny) to immunotest wykonywany na płytkach, w którym wychwyt analitu sygnalizuje enzym — zwykle HRP lub fosfataza alkaliczna — skoniugowany z przeciwciałem i przekształcający substrat, np. TMB, w barwny produkt odczytywany spektrofotometrycznie.
Formaty i który z nich jest potrzebny dla peptydu
Standardowe są cztery formaty. W ELISA bezpośredniej i pośredniej antygen opłaszcza się na płytce i wykrywa przeciwciałem znakowanym lub przeciwciałem drugorzędowym znakowanym. ELISA kanapkowa wykorzystuje przeciwciało wychwytujące i przeciwciało wykrywające skierowane przeciw dwóm odrębnym epitopom i jest najczulsza oraz najbardziej swoista — wymaga jednak analitu na tyle dużego, by jednocześnie eksponował dwa epitopy, więc dla większości krótkich peptydów jest niedostępna. Rozwiązaniem jest ELISA kompetycyjna: znakowany antygen konkuruje z analitem z próbki o ograniczoną ilość przeciwciała, a sygnał spada wraz ze wzrostem ilości analitu. Krótkie peptydy oznacza się zatem zwykle testem kompetycyjnym z odwrotną krzywą wzorcową.
Krytyczna ocena zestawu polega na sprawdzeniu deklarowanej reaktywności krzyżowej i reaktywności gatunkowej oraz tego, czy kalibrator ma tę samą formę soli i sekwencję co badana próbka. Typowym modelem krzywej jest dopasowanie logistyczne czteroparametrowe, a nie linia prosta.
Powiązane terminy i materiały
RIA · immunogen · peptyd blokujący. Materiały referencyjne: zestawy do oznaczeń. Dalsza lektura: zestawy ELISA do badań peptydów oraz jak zestawy ELISA i RIA oznaczają ilościowo peptydy.