Glosar
ELISA
Formatele ELISA (direct, indirect, sandwich, competitiv) explicate, de ce peptidele scurte necesită teste competitive și cum se citește curba standard.
ELISA (testul imunoenzimatic) este un imunotest pe placă în care captura analitului este semnalată de o enzimă — de obicei HRP sau fosfatază alcalină — conjugată cu un anticorp, care transformă un substrat precum TMB într-un produs colorat citit la spectrofotometru.
Formate și de care are nevoie o peptidă
Există patru formate standard. ELISA directă și indirectă acoperă placa cu antigenul și îl detectează cu un anticorp marcat sau cu un anticorp secundar marcat. ELISA de tip sandwich utilizează un anticorp de captură și un anticorp de detecție îndreptați împotriva a doi epitopi distincți și este cea mai sensibilă și specifică — însă necesită un analit suficient de mare pentru a prezenta simultan doi epitopi, astfel încât nu este disponibilă pentru majoritatea peptidelor scurte. ELISA competitivă rezolvă această problemă: antigenul marcat concurează cu analitul din probă pentru o cantitate limitată de anticorp, iar semnalul scade pe măsură ce analitul crește. Peptidele scurte sunt, prin urmare, cuantificate în mod normal prin test competitiv, cu o curbă standard inversă.
Evaluarea critică a unui kit înseamnă verificarea reactivității încrucișate declarate, a reactivității de specie și a faptului că etalonul are aceeași formă de sare și aceeași secvență ca proba dumneavoastră. Modelul de curbă uzual este o ajustare logistică cu patru parametri, nu o dreaptă.
Termeni și materiale înrudite
RIA · imunogen · peptidă de blocare. Material de referință: kituri de testare. Lectură suplimentară: kituri ELISA pentru cercetarea peptidelor și cum cuantifică peptidele kiturile ELISA și RIA.