ELISA

L'ELISA (saggio immunoassorbente legato a enzima) è un immunodosaggio su piastra in cui la cattura dell'analita è segnalata da un enzima — di solito HRP o fosfatasi alcalina — coniugato a un anticorpo, che converte un substrato come il TMB in un prodotto colorato letto allo spettrofotometro.

I formati, e quale serve per un peptide

I formati standard sono quattro. Gli ELISA diretto e indiretto rivestono la piastra con l'antigene e lo rilevano con un anticorpo marcato o con un anticorpo secondario marcato. L'ELISA sandwich utilizza un anticorpo di cattura e un anticorpo di rilevazione diretti contro due epitopi distinti ed è il più sensibile e specifico, ma richiede un analita abbastanza grande da presentare contemporaneamente due epitopi, per cui non è utilizzabile per la maggior parte dei peptidi corti. L'ELISA competitivo risolve il problema: l'antigene marcato compete con l'analita del campione per una quantità limitata di anticorpo, e il segnale diminuisce all'aumentare dell'analita. I peptidi corti vengono quindi normalmente quantificati con un saggio competitivo con curva standard inversa.

Valutare criticamente un kit significa verificare la reattività crociata dichiarata, la reattività di specie e se il calibratore abbia la stessa forma salina e la stessa sequenza del campione. Il modello di curva abituale è un fit logistico a quattro parametri, non una retta.

Termini e materiali correlati

RIA · immunogeno · peptide bloccante. Materiale di riferimento: kit di dosaggio. Approfondimenti: kit ELISA per la ricerca sui peptidi e come i kit ELISA e RIA quantificano i peptidi.