Antisérum

Antisérum je celé sérum odebrané zvířeti po imunizaci: krev se nechá srazit, odstraní se buňky a fibrin a zbývá kapalná frakce. Podstatné je, že obsahuje protilátky namířené proti Vašemu imunogenu i celý předem existující repertoár imunoglobulinů zvířete, a navíc albumin, složky komplementu a sérové proteázy.

Proč na formátu záleží

Protilátka specifická pro cíl obvykle tvoří jen několik procent celkového IgG v antiséru. Pro aplikace, kde nadbytek irelevantního proteinu nevadí — mnohá použití v ELISA a dot-blotu nebo imunohistochemie při vysokém ředění — je antisérum nejlevnější a nejavidnější volbou a jeho vysoký celkový obsah proteinu dokonce funguje jako vlastní nosič. Pro cokoli, co vyžaduje konjugaci, nízké pozadí nebo definovanou koncentraci proteinu, je nadbytečný materiál přítěží: značkovací chemie modifikuje veškerý IgG bez rozdílu a nespecifická vazba séra zvyšuje pozadí.

Titr antiséra se vyjadřuje jako pracovní ředění poskytující přijatelný signál, nikoli v mg/mL specifické protilátky, protože specifická koncentrace je obecně neznámá. Jako konzervant bývá obvykle přítomen azid sodný nebo glycerol, což je neslučitelné s konjugáty HRP a mělo by být před použitím ověřeno.

Související pojmy a materiály

purifikovaný IgG · polyklonální vs. monoklonální · druhová reaktivita. Referenční materiál: katalog protilátek. Další čtení: antisérum vs. purifikovaný IgG.