Glosář
Protilátka (polyklonální vs. monoklonální)
Polyklonální protilátky rozpoznávají mnoho epitopů a liší se mezi šaržemi; monoklonální rozpoznávají jeden a jsou obnovitelné. Jak volit pro detekci peptidů.
Protilátka je imunoglobulin, který váže specifický molekulární znak — epitop. Rozlišení na polyklonální a monoklonální popisuje, jak bylo činidlo vyrobeno, a určuje téměř každé praktické rozhodnutí při detekci peptidů.
Kompromis
Polyklonální protilátky jsou heterogenní populace získaná z imunizovaného hostitele, obvykle králíka, kozy nebo ovce, po imunizaci imunogenem. Protože odpovídá mnoho linií B-buněk, směs rozpoznává několik epitopů současně. To přináší vysokou aviditu, toleranci k částečné denaturaci či modifikaci a silný signál — za cenu variability mezi šaržemi a omezené zásoby vázané na jeden odběr krve zvířete.
Monoklonální protilátky pocházejí z jediného klonu B-buněk imortalizovaného jako hybridom (nebo rekombinantně exprimovaného z klonovaných sekvencí), takže každá molekula je identická a váže jeden epitop. Jsou obnovitelné a neomezeně reprodukovatelné, ale jediná bodová mutace, blokované modifikační místo nebo denaturační krok ve Vašem protokolu může vazbu zcela zrušit.
Orientační pravidlo pro krátké peptidy: polyklonální protilátky pro záchyt a imunoprecipitaci, kde pomáhá avidita, monoklonální všude tam, kde je nutné vyloučit zkříženou reaktivitu mezi blízkými analogy. Páry pro sendvičovou ELISA často kombinují jednu od každého typu.
Související pojmy a materiály
antisérum · purifikovaný IgG · druhová reaktivita · blokující peptid. Referenční materiál: katalog protilátek. Další čtení: protilátky ve výzkumu peptidů.