Antisiero

L'antisiero è l'intero siero raccolto da un animale dopo l'immunizzazione: si lascia coagulare il sangue, si rimuovono cellule e fibrina, e ciò che resta è la frazione liquida. Aspetto cruciale, contiene gli anticorpi prodotti contro l'immunogeno impiegato e l'intero repertorio immunoglobulinico preesistente dell'animale, oltre ad albumina, componenti del complemento e proteasi sieriche.

Perché il formato è importante

L'anticorpo specifico per il bersaglio rappresenta tipicamente solo una piccola percentuale delle IgG totali in un antisiero. Per le applicazioni in cui l'eccesso di proteine irrilevanti è innocuo — molti usi in ELISA e dot-blot, o l'immunoistochimica ad alta diluizione — l'antisiero è l'opzione più economica e con maggiore avidità, e il suo elevato contenuto proteico totale funge persino da carrier. Per tutto ciò che richiede coniugazione, fondo basso o una concentrazione proteica definita, il materiale in eccesso è uno svantaggio: la chimica di marcatura modifica indiscriminatamente tutte le IgG, e il legame aspecifico del siero aumenta il fondo.

Il titolo di un antisiero si esprime come diluizione di lavoro che fornisce un segnale accettabile, non come mg/mL di anticorpo specifico, perché la concentrazione specifica è generalmente ignota. Di norma è presente sodio azide o glicerolo come conservante, incompatibile con i coniugati HRP, da verificare prima dell'uso.

Termini e materiali correlati

IgG purificate · policlonale vs monoclonale · reattività di specie. Materiale di riferimento: catalogo degli anticorpi. Approfondimenti: antisiero vs IgG purificate.