Hmotnostní spektrometrie

Hmotnostní spektrometrie (MS) ionizuje vzorek a měří poměry hmotnosti k náboji, z nichž se vypočítá molekulová hmotnost. V certifikátu peptidu odpovídá na otázku identity, na kterou chromatografie odpovědět nedokáže: je molekula v této lahvičce skutečně sekvencí uvedenou na etiketě? Elektrosprejová ionizace (ESI-MS) a MALDI-TOF jsou dvě nejčastěji uváděné metody.

Jak číst řádek MS

Porovnejte naměřenou hmotnost s teoretickou hmotností vypočtenou ze sekvence. Obě hodnoty by se měly shodovat v rámci udávané tolerance přístroje — u moderního ESI přístroje typicky na zlomek daltonu, u MALDI-TOF na několik daltonů. ESI spektra peptidů vykazují řadu vícenásobně nabitých iontů ([M+2H]2+, [M+3H]3+), které software dekonvolucí převede na jedinou neutrální hmotnost; certifikát, který uvádí pouze surovou hodnotu m/z bez uvedení nábojového stavu, je neúplný.

Diagnostické rozdíly hmotnosti

Běžné odchylky jsou vypovídající: +16 Da naznačuje oxidaci, typicky na methioninu; −0.98 Da odlišuje C-terminální amid od volné kyseliny; +42 Da ukazuje na acetylaci; +1 Da může znamenat deamidaci. Neshoda přesně o hmotnost jednoho aminokyselinového zbytku ukazuje na deleci nebo substituci.

Proč je to důležité

Vysoká hodnota HPLC u nesprávné molekuly je bezcenná. Identita a čistota stanovené na téže šarži jsou minimální důvěryhodnou dvojicí údajů v certifikátu analýzy.

Související pojmy

Viz hmotnostní spektrometrie a identita peptidu.