Spettrometria di massa

La spettrometria di massa (MS) ionizza un campione e misura i rapporti massa/carica, dai quali si calcola la massa molecolare. Su un certificato di un peptide risponde alla domanda sull'identità a cui la cromatografia non può rispondere: la molecola in questo flaconcino è la sequenza indicata sull'etichetta? La ionizzazione electrospray (ESI-MS) e la MALDI-TOF sono i due metodi citati di solito.

Leggere la riga MS

Si confronti la massa osservata con la massa teorica calcolata dalla sequenza. Le due devono concordare entro la tolleranza dichiarata dello strumento: in genere una frazione di dalton su un moderno strumento ESI, qualche dalton su MALDI-TOF. Gli spettri ESI dei peptidi mostrano una serie di ioni a carica multipla ([M+2H]2+, [M+3H]3+) che il software deconvolve in un'unica massa neutra; un certificato che riporta solo un m/z grezzo senza indicare lo stato di carica è incompleto.

Differenze di massa diagnostiche

Gli scostamenti comuni sono informativi: +16 Da suggerisce un'ossidazione, tipicamente della metionina; −0.98 Da distingue un'ammide C-terminale dall'acido libero; +42 Da indica un'acetilazione; +1 Da può indicare una deamidazione. Una discrepanza pari esattamente alla massa di un residuo indica una delezione o una sostituzione.

Perché è importante

Un valore HPLC elevato riferito alla molecola sbagliata non ha alcun valore. Identità e purezza sullo stesso lotto sono la coppia minima credibile su un certificato di analisi.

Termini correlati

Si veda spettrometria di massa e identità dei peptidi.