HPLC

HPLC (high-performance liquid chromatography) perst een opgelost monster onder hoge druk door een gepakte kolom, zodat componenten scheiden op basis van hoe sterk ze met de stationaire fase interageren. Voor peptiden is de standaardmethode reversed-phase-HPLC op een C18-kolom met een water/acetonitrilgradiënt en 0,1% trifluorazijnzuur, met detectie via UV-absorptie bij 214 nm, waar de peptidebinding zelf absorbeert.

Wat het zuiverheidsgetal betekent

De gerapporteerde zuiverheid is normaal gesproken een oppervlaktepercentage: het oppervlak van de hoofdpiek gedeeld door het totale oppervlak van alle geïntegreerde pieken. Een resultaat van 98,6% betekent dat 98,6% van het gedetecteerde UV-signaal als één piek elueerde. Het is een relatieve maat, geen bepaling van hoeveel peptide er in de flacon zit — water, tegenion en niet-absorberende hulpstoffen zijn ervoor onzichtbaar.

Wat het u niet vertelt

HPLC scheidt; het identificeert niet. Een dicht bij de hoofdpiek eluerende deletiesequentie kan zich onder de hoofdpiek verbergen, en een onzuiverheid zonder chromofoor wordt bij 214 nm mogelijk niet geregistreerd. Daarom koppelt een geloofwaardig certificaat het chromatogram aan een identiteitsresultaat uit massaspectrometrie voor hetzelfde lot.

Gerelateerde termen

analysecertificaat · tests door derden. Lees wat ≥98% werkelijk betekent en hoe u een COA leest.