HPLC

L’HPLC (chromatographie liquide haute performance) fait passer un échantillon dissous sous haute pression à travers une colonne garnie, de sorte que les composants se séparent selon la force de leur interaction avec la phase stationnaire. Pour les peptides, la méthode de référence est l’HPLC en phase inverse sur colonne C18, avec un gradient eau/acétonitrile contenant 0.1% d’acide trifluoroacétique et une détection par absorbance UV à 214 nm, longueur d’onde à laquelle absorbe la liaison peptidique elle-même.

Ce que signifie le chiffre de pureté

La pureté rapportée est normalement un pourcentage d’aire : l’aire du pic principal divisée par l’aire totale de tous les pics intégrés. Un résultat de 98.6% signifie que 98.6% du signal UV détecté a été élué sous la forme d’un seul pic. Il s’agit d’une mesure relative, et non d’un dosage de la quantité de peptide présente dans le flacon — l’eau, le contre-ion et les excipients non absorbants lui échappent totalement.

Ce qu’elle ne vous dit pas

L’HPLC sépare ; elle n’identifie pas. Une séquence de délétion éluée tout près peut se cacher sous le pic principal, et une impureté dépourvue de chromophore peut ne pas être détectée à 214 nm. C’est pourquoi un certificat crédible associe le chromatogramme à un résultat d’identité par spectrométrie de masse portant sur le même lot.

Termes associés

certificat d’analyse · tests par un laboratoire tiers. Lisez ce que signifie réellement ≥98% et comment lire un COA.