HPLC

HPLC (vysokoúčinná kapalinová chromatografie) protlačuje rozpuštěný vzorek pod vysokým tlakem náplňovou kolonou, takže se složky oddělí podle síly interakce se stacionární fází. Pro peptidy je standardní metodou HPLC s reverzní fází na koloně C18 s gradientem voda/acetonitril a 0.1% kyseliny trifluoroctové, s detekcí UV absorbance při 214 nm, kde absorbuje samotná peptidová vazba.

Co znamená údaj o čistotě

Uváděná čistota je obvykle plošné procento: plocha hlavního píku dělená celkovou plochou všech integrovaných píků. Výsledek 98.6% znamená, že 98.6% detekovaného UV signálu eluovalo jako jeden pík. Jde o relativní míru, nikoli o stanovení množství peptidu v lahvičce — voda, protiion a neabsorbující pomocné látky jsou pro ni neviditelné.

Co Vám neřekne

HPLC odděluje; neidentifikuje. Blízce eluující deleční sekvence se může skrývat pod hlavním píkem a nečistota bez chromoforu se při 214 nm nemusí projevit. Proto důvěryhodný certifikát doplňuje chromatogram výsledkem identity hmotnostní spektrometrií pro tutéž šarži.

Související pojmy

certifikát analýzy · nezávislé laboratorní testování. Přečtěte si, co ≥98% skutečně znamená a jak číst COA.