Glossar
HPLC
Die HPLC trennt ein Peptid von seinen Verunreinigungen und gibt die Reinheit als Flächenprozent bei fester Wellenlänge an. Was der Wert abdeckt und was nicht.
Bei der HPLC (Hochleistungsflüssigkeitschromatographie) wird eine gelöste Probe unter hohem Druck durch eine gepackte Säule gepresst, sodass sich die Komponenten danach trennen, wie stark sie mit der stationären Phase wechselwirken. Für Peptide ist die Standardmethode die Umkehrphasen-HPLC an einer C18-Säule mit einem Wasser/Acetonitril-Gradienten und 0.1% Trifluoressigsäure, detektiert über die UV-Absorption bei 214 nm, wo die Peptidbindung selbst absorbiert.
Was der Reinheitswert bedeutet
Die angegebene Reinheit ist normalerweise ein Flächenprozentwert: die Fläche des Hauptpeaks geteilt durch die Gesamtfläche aller integrierten Peaks. Ein Ergebnis von 98.6% bedeutet, dass 98.6% des detektierten UV-Signals als ein Peak eluiert sind. Es ist ein relatives Maß, keine Gehaltsbestimmung, wie viel Peptid sich im Vial befindet — Wasser, Gegenion und nicht absorbierende Hilfsstoffe sind dafür unsichtbar.
Was sie Ihnen nicht verrät
Die HPLC trennt; sie identifiziert nicht. Eine dicht benachbart eluierende Deletionssequenz kann sich unter dem Hauptpeak verbergen, und eine Verunreinigung ohne Chromophor wird bei 214 nm möglicherweise nicht erfasst. Deshalb kombiniert ein glaubwürdiges Zertifikat das Chromatogramm mit einem Identitätsnachweis per Massenspektrometrie für dieselbe Charge.
Verwandte Begriffe
Analysenzertifikat · Prüfung durch Drittlabore. Lesen Sie, was ≥98% tatsächlich bedeutet und wie man ein COA liest.