HPLC

HPLC (cromatografia de lichide de înaltă performanță) împinge o probă dizolvată printr-o coloană umplută, sub presiune mare, astfel încât componentele se separă în funcție de cât de puternic interacționează cu faza staționară. Pentru peptide, metoda standard este HPLC în fază inversă pe o coloană C18, cu un gradient apă/acetonitril și 0,1% acid trifluoroacetic, cu detecție prin absorbanță UV la 214 nm, unde absoarbe chiar legătura peptidică.

Ce înseamnă valoarea purității

Puritatea raportată este în mod normal procentul din arie: aria picului principal împărțită la aria totală a tuturor picurilor integrate. Un rezultat de 98,6% înseamnă că 98,6% din semnalul UV detectat a eluat ca un singur pic. Este o măsură relativă, nu o determinare a cantității de peptidă din flacon — apa, contraionul și excipienții care nu absorb sunt invizibili pentru această metodă.

Ce nu vă spune

HPLC separă; nu identifică. O secvență de deleție care eluează foarte aproape se poate ascunde sub picul principal, iar o impuritate fără cromofor poate să nu fie detectată la 214 nm. De aceea, un certificat credibil asociază cromatograma cu un rezultat de identitate prin spectrometrie de masă pentru același lot.

Termeni înrudiți

certificat de analiză · testare de către terți. Citiți ce înseamnă de fapt ≥98% și cum se interpretează un COA.