HPLC

La HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) hace pasar una muestra disuelta a través de una columna empaquetada a alta presión, de modo que los componentes se separan según la intensidad de su interacción con la fase estacionaria. Para los péptidos, el método estándar es la HPLC de fase inversa en columna C18 con un gradiente de agua/acetonitrilo y ácido trifluoroacético al 0.1%, con detección por absorbancia UV a 214 nm, donde absorbe el propio enlace peptídico.

Qué significa la cifra de pureza

La pureza indicada suele ser el porcentaje de área: el área del pico principal dividida por el área total de todos los picos integrados. Un resultado del 98.6% significa que el 98.6% de la señal UV detectada eluyó como un único pico. Es una medida relativa, no una valoración de cuánto péptido hay en el vial: el agua, el contraión y los excipientes que no absorben son invisibles para ella.

Lo que no le indica

La HPLC separa; no identifica. Una secuencia de deleción que eluye muy cerca puede ocultarse bajo el pico principal, y una impureza sin cromóforo puede no registrarse a 214 nm. Por eso un certificado fiable acompaña el cromatograma de un resultado de identidad por espectrometría de masas del mismo lote.

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