HPLC

HPLC (wysokosprawna chromatografia cieczowa) przetłacza rozpuszczoną próbkę przez wypełnioną kolumnę pod wysokim ciśnieniem, tak aby składniki rozdzieliły się w zależności od siły oddziaływania z fazą stacjonarną. Dla peptydów standardową metodą jest HPLC w odwróconym układzie faz na kolumnie C18 z gradientem woda/acetonitryl i 0.1% kwasu trifluorooctowego, z detekcją absorbancji UV przy 214 nm, gdzie absorbuje samo wiązanie peptydowe.

Co oznacza wartość czystości

Podawana czystość to zwykle procent powierzchni: powierzchnia piku głównego podzielona przez łączną powierzchnię wszystkich scałkowanych pików. Wynik 98.6% oznacza, że 98.6% wykrytego sygnału UV wyeluowało się jako jeden pik. Jest to miara względna, a nie oznaczenie ilości peptydu w fiolce — woda, przeciwjon i nieabsorbujące substancje pomocnicze są dla niej niewidoczne.

Czego nie mówi

HPLC rozdziela, ale nie identyfikuje. Blisko eluująca sekwencja delecyjna może ukryć się pod pikiem głównym, a zanieczyszczenie bez chromoforu może nie zostać wykryte przy 214 nm. Dlatego wiarygodny certyfikat łączy chromatogram z wynikiem potwierdzenia tożsamości metodą spektrometrii mas dla tej samej partii.

Powiązane terminy

certyfikat analizy · testy niezależnego laboratorium. Przeczytaj, co naprawdę oznacza ≥98% i jak czytać COA.