HPLC

L'HPLC (cromatografia liquida ad alte prestazioni) spinge un campione disciolto attraverso una colonna impaccata ad alta pressione, in modo che i componenti si separino in base alla forza con cui interagiscono con la fase stazionaria. Per i peptidi il metodo standard è l'HPLC a fase inversa su colonna C18 con gradiente acqua/acetonitrile e acido trifluoroacetico allo 0.1%, con rilevazione mediante assorbanza UV a 214 nm, dove assorbe il legame peptidico stesso.

Che cosa significa il valore di purezza

La purezza riportata è normalmente una percentuale d'area: l'area del picco principale divisa per l'area totale di tutti i picchi integrati. Un risultato del 98.6% significa che il 98.6% del segnale UV rilevato è eluito come un unico picco. È una misura relativa, non un dosaggio della quantità di peptide nel flaconcino: acqua, controione ed eccipienti non assorbenti le sono invisibili.

Che cosa non dice

L'HPLC separa, non identifica. Una sequenza di delezione con eluizione molto vicina può nascondersi sotto il picco principale, e un'impurezza priva di cromoforo può non essere rilevata a 214 nm. È per questo che un certificato credibile affianca al cromatogramma un risultato di identità mediante spettrometria di massa per lo stesso lotto.

Termini correlati

certificato di analisi · test di terze parti. Si legga che cosa significa davvero ≥98% e come leggere un COA.