Woordenlijst
Iso-elektrisch punt (pI)
Het pI is de pH waarbij een peptide geen nettolading heeft — en waarbij het het slechtst oplost. Hoe u het gebruikt als een flacon niet helder wil worden.
Het iso-elektrisch punt (pI) is de pH waarbij de positieve en negatieve ladingen van een peptide in evenwicht zijn en de nettolading nul is. Het wordt bepaald door de samenstelling van ioniseerbare groepen: het N-terminale amine, het C-terminale carboxyl en de zijketens van aspartaat, glutamaat, cysteïne, histidine, lysine, arginine en tyrosine. Sequenties met overwegend basische residuen hebben een hoog pI; zure sequenties een laag.
Waarom het iso-elektrisch punt ertoe doet in peptideonderzoek
Bij zijn pI is er geen elektrostatische afstoting tussen de moleculen van een peptide, dus bevindt het zich op zijn oplosbaarheidsminimum. Dat ene feit verklaart een groot deel van de reconstitutieproblemen: een peptide dat in een bijna neutraal verdunningsmiddel niet helder wordt, heeft vaak een pI rond 7, en de oplossing één of twee pH-eenheden verschuiven herstelt de oplosbaarheid. Het gevolg is een praktische regel — verzuur een basisch peptide, maak een zuur peptide alkalisch, en verdun pas daarna in de werkbuffer.
Het pI bepaalt ook het analytische gedrag. Het bepaalt de migratie bij iso-elektrische focussering en de retentie bij ionenuitwisseling, en het staat in wisselwerking met het aanwezige tegenion, omdat TFA- en acetaatvormen zich verschillend gedragen. Zie de gids over oplosbaarheid en de reconstitutiegids.
Gerelateerde termen
hydrofiel · lipofiel · molecuulgewicht