Glosář
Izoelektrický bod (pI)
pI je pH, při kterém peptid nenese žádný čistý náboj — a kdy je nejméně rozpustný. Jak jej využít, když se obsah lahvičky nechce vyčeřit.
Izoelektrický bod (pI) je pH, při kterém se kladné a záporné náboje peptidu vyrovnávají a čistý náboj je nulový. Určuje jej složení ionizovatelných skupin: N-terminálního aminu, C-terminálního karboxylu a postranních řetězců aspartátu, glutamátu, cysteinu, histidinu, lysinu, argininu a tyrozinu. Sekvence s převahou bazických zbytků mají vysoký pI; kyselé sekvence nízký.
Proč je izoelektrický bod ve výzkumu peptidů důležitý
Při svém pI nemá peptid mezi molekulami žádné elektrostatické odpuzování, takže je na svém minimu rozpustnosti. Tato jediná skutečnost vysvětluje velkou část problémů s rekonstitucí: peptid, který se v téměř neutrálním rozpouštědle nevyčeří, má často pI blízko 7 a posunutí roztoku o jednu či dvě jednotky pH rozpustnost obnoví. Z toho plyne praktické pravidlo — bazický peptid okyselte, kyselý zalkalizujte a teprve poté jej zřeďte do pracovního pufru.
pI také řídí analytické chování. Určuje migraci při izoelektrické fokusaci a retenci při iontovýměnné chromatografii a interaguje s přítomným protiiontem, protože formy TFA a acetátu se chovají odlišně. Viz průvodce rozpustností a průvodce rekonstitucí.
Související pojmy
hydrofilní · lipofilní · molekulová hmotnost