Glossar
Isoelektrischer Punkt (pI)
Der pI ist der pH-Wert, bei dem ein Peptid keine Nettoladung trägt — und am schlechtesten löslich ist. So nutzen Sie ihn, wenn eine Lösung nicht klar wird.
Der isoelektrische Punkt (pI) ist der pH-Wert, bei dem sich die positiven und negativen Ladungen eines Peptids ausgleichen und die Nettoladung null ist. Er wird durch die Zusammensetzung der ionisierbaren Gruppen bestimmt: das N-terminale Amin, das C-terminale Carboxyl und die Seitenketten von Aspartat, Glutamat, Cystein, Histidin, Lysin, Arginin und Tyrosin. Sequenzen mit überwiegend basischen Resten haben einen hohen pI, saure Sequenzen einen niedrigen.
Warum der isoelektrische Punkt in der Peptidforschung wichtig ist
An seinem pI fehlt einem Peptid die elektrostatische Abstoßung zwischen den Molekülen, sodass es sein Löslichkeitsminimum erreicht. Diese eine Tatsache erklärt einen großen Teil der Rekonstitutionsprobleme: Ein Peptid, das in nahezu neutralem Lösungsmittel nicht klar wird, hat oft einen pI nahe 7, und eine Verschiebung der Lösung um ein bis zwei pH-Einheiten stellt die Löslichkeit wieder her. Daraus folgt eine praktische Regel: Ein basisches Peptid ansäuern, ein saures alkalisieren und erst dann in den Arbeitspuffer verdünnen.
Der pI bestimmt auch das analytische Verhalten. Er legt die Migration bei der isoelektrischen Fokussierung und die Retention im Ionenaustausch fest und wechselwirkt mit dem vorhandenen Gegenion, da sich TFA- und Acetatformen unterschiedlich verhalten. Siehe den Leitfaden zur Löslichkeit und den Leitfaden zur Rekonstitution.
Verwandte Begriffe
hydrophil · lipophil · Molekulargewicht