Spektrometria mas

Spektrometria mas (MS) jonizuje próbkę i mierzy stosunki masy do ładunku, z których oblicza się masę cząsteczkową. W certyfikacie peptydu odpowiada na pytanie o tożsamość, na które chromatografia nie odpowie: czy cząsteczka w tej fiolce to sekwencja podana na etykiecie? Jonizacja przez elektrorozpraszanie (ESI-MS) i MALDI-TOF to dwie najczęściej przywoływane metody.

Jak czytać wiersz MS

Należy porównać masę zmierzoną z masą teoretyczną obliczoną z sekwencji. Powinny być zgodne w granicach tolerancji deklarowanej dla aparatu — zwykle ułamka daltona w nowoczesnym aparacie ESI i kilku daltonów w MALDI-TOF. Widma ESI peptydów zawierają serię jonów wielokrotnie naładowanych ([M+2H]2+, [M+3H]3+), które oprogramowanie przelicza (dekonwolucja) na jedną masę cząsteczki obojętnej; certyfikat podający jedynie surową wartość m/z bez stanu naładowania jest niepełny.

Diagnostyczne różnice mas

Typowe przesunięcia są pouczające: +16 Da sugeruje utlenienie, zwykle metioniny; −0.98 Da odróżnia amid C-końcowy od wolnego kwasu; +42 Da wskazuje na acetylację; +1 Da może oznaczać deamidację. Niezgodność równa dokładnie masie jednej reszty wskazuje na delecję lub podstawienie.

Dlaczego to ważne

Wysoki wynik HPLC dla niewłaściwej cząsteczki jest bezwartościowy. Tożsamość i czystość dla tej samej partii to minimalna wiarygodna para danych w certyfikacie analizy.

Powiązane terminy

Zob. spektrometria mas a tożsamość peptydu.