Espectrometría de masas

La espectrometría de masas (MS) ioniza una muestra y mide relaciones masa/carga, a partir de las cuales se calcula la masa molecular. En el certificado de un péptido responde a la pregunta de identidad que la cromatografía no puede resolver: ¿es la molécula de este vial la secuencia que figura en la etiqueta? La ionización por electrospray (ESI-MS) y MALDI-TOF son los dos métodos citados habitualmente.

Cómo leer la línea de MS

Compare la masa observada con la masa teórica calculada a partir de la secuencia. Deben coincidir dentro de la tolerancia declarada del instrumento: normalmente una fracción de dalton en un equipo ESI moderno y unos pocos daltons en MALDI-TOF. Los espectros ESI de péptidos muestran una serie de iones con carga múltiple ([M+2H]2+, [M+3H]3+) que el software deconvoluciona en una única masa neutra; un certificado que solo indica un m/z bruto sin especificar el estado de carga está incompleto.

Diferencias de masa diagnósticas

Los desplazamientos habituales son informativos: +16 Da sugiere oxidación, normalmente en la metionina; −0.98 Da distingue una amida C-terminal del ácido libre; +42 Da indica acetilación; +1 Da puede significar desamidación. Una discrepancia de exactamente la masa de un residuo apunta a una deleción o una sustitución.

Por qué es importante

Una cifra de HPLC alta de la molécula equivocada no vale nada. Identidad más pureza del mismo lote es el par mínimo creíble en un certificado de análisis.

Términos relacionados

Consulte espectrometría de masas e identidad de los péptidos.