Spectrométrie de masse

La spectrométrie de masse (MS) ionise un échantillon et mesure des rapports masse sur charge, à partir desquels la masse moléculaire est calculée. Sur un certificat de peptide, elle répond à la question d’identité que la chromatographie ne peut pas trancher : la molécule contenue dans ce flacon est-elle bien la séquence indiquée sur l’étiquette ? L’ionisation par électronébulisation (ESI-MS) et le MALDI-TOF sont les deux méthodes habituellement citées.

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Comparez la masse observée à la masse théorique calculée à partir de la séquence. Elles doivent concorder dans la tolérance déclarée de l’instrument — généralement une fraction de dalton sur un instrument ESI moderne, quelques daltons en MALDI-TOF. Les spectres ESI des peptides présentent une série d’ions multichargés ([M+2H]2+, [M+3H]3+) que le logiciel déconvolue en une masse neutre unique ; un certificat qui ne rapporte qu’un m/z brut sans préciser l’état de charge est incomplet.

Écarts de masse diagnostiques

Les écarts courants sont informatifs : +16 Da évoque une oxydation, typiquement sur la méthionine ; −0.98 Da distingue un amide C-terminal de l’acide libre ; +42 Da signale une acétylation ; +1 Da peut indiquer une désamidation. Un écart correspondant exactement à la masse d’un résidu oriente vers une délétion ou une substitution.

Pourquoi c’est important

Un chiffre HPLC élevé sur la mauvaise molécule ne vaut rien. L’identité et la pureté mesurées sur le même lot constituent le minimum crédible sur un certificat d’analyse.

Termes associés

Voir spectrométrie de masse et identité des peptides.